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                    跑電泳常見條帶問題分析

                    跑電泳常見條帶問題分析 | 時間: June-5 17:45:45 | 分類:技術欄目

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                    一、微笑形區帶(兩邊翹起,中間凹下): 

                            形成原因:主要是由凝膠中間部分凝固不均勻引起的,多出現于較厚的凝膠中。
                            處理辦法:待其充分凝固再做實驗。
                    二、皺眉形區帶(兩邊向下,中間鼓起):
                            形成原因:主要出現在蛋白質垂直電泳槽中,一般是由兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈引起的。
                            處理辦法:可在兩板之間加入適量緩沖液,以排除氣泡。
                    三、區帶拖尾:
                            形成原因:主要是由樣品溶解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。
                            處理辦法:加樣前離心;選擇適當的樣品緩沖液,加適量樣品促溶劑;電泳緩沖液放置時間過長,重新配制;降低凝膠濃度。
                    四、區帶出現紋理:
                            形成原因:主要是由樣品不溶性顆粒引起的。
                            處理辦法:加樣前離心,加適量樣品促溶劑。
                    五、鬼帶:
                            形成原因:主要是由于還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性,致使原來被解離的蛋白質分子重新折疊結合和亞基重新締合,聚合成大分子,其分子量比目標區帶大,有時不能進入分離膠。但它與目標區帶有相同的免疫學活性,在免疫印跡反應中可見,能與目標區帶對應的抗體作用。
                            處理辦法:加熱煮沸后再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇,以補充不足的還原劑;加適量EDTA來阻止還原劑的氧化。
                    六、溴酚藍不能起到指示作用:
                            形成原因:實驗中常遇到溴酚藍已跑出板底,但蛋白質卻還未跑下來的現象,主要與緩沖液和分離膠的濃度有關。
                            處理辦法:更換正確pH值的Buffer,降低分離膠濃度。
                    七、區帶很粗:
                            形成原因:主要是由于濃縮膠未濃縮好。
                            處理辦法:適當增加濃縮膠長度,保證濃縮膠貯液的pH正確(6.8),適當降低電壓。
                    八、電泳電壓很高而電流很低:
                            形成原因:主要是由于電泳槽沒有正確裝配,電流未形成通路。
                            處理辦法:電泳槽正確裝配。
                     

                    本文標題: 跑電泳常見條帶問題分析 | Tags:電泳 跑電泳常見條帶問題分析

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